Bei der Lotsenstube handelt es sich um den ehemaligen Aufenthaltsraum der Elb- und Kanallotsen, der 1895 zur Eröffnung des Kaiser-Wilhelm-Kanals bzw. Nord-Ostsee-Kanals gebaut wurde. Die Originalausstattung ist vorhanden: Gemälde, Graphiken, Tresen, Mobiliar, Kamin, Beleuchtung, Decke und Wandvertäfelung. Ergänzt wurde die Ausstattung um Möbel der Lotsen-Brüderschaften und eine Navigationsvitrine (astronomische Navigation; Sextant, Chronometer).